为何在HPLC分析中必须使用超纯水?

在样品进行HPLC分析时，实验者必须使用超纯水才能够保证测量结果的稳定性和重复性，这是为什么呢？

超纯水在HPLC检测中的主要角色

• ①样品溶解；
• ②标准样品制备；
• ③作为空白试剂；
• ④清洗器皿。

水质不纯对HPLC检测的影响

离子杂质的危害：影响水的电导率和pH；与溶液中组分反应。改变吸收谱线，影响仪器判读；一些离子会腐蚀仪器

有机物杂质的危害：干扰仪器分析的背景；微生物滋生的营养物质。

颗粒杂质的危害：阻塞过滤系统；损坏泵系统；吸附电荷影响离子浓度。折射光线影响判读；提供细菌滋生载体。

微生物杂质的危害：产生菌膜持续释放污染物；堵塞仪器通道。

气体杂质的危害：影响水的离子浓度和PH值；直接参与反应。影响水有效体积；影响光学测定结果。

TOC过高的危害：灵敏度降低：移动相中的有机分子干扰样品峰。分析结果难以分析及重复性降低：出现unknown的peak判断错误因而提高浓度：杂质与分析物一起流出。滞留时间改变(形成复合物)杂质与介质非可逆性的结合导致分析时间过长并且分辨率降低。

HPLC使用者的期望

• 稳定的基线(容易进行面积积分)。
• 良好的分辨率(=分离能力)。
• 易辨认的对称性波峰。
• 好的波峰高度/宽度比。
• 稳定的洗脱时间。

为何在HPLC中要使用超纯水？

用水的纯度决定实验的可控性与重复性使用超纯水对于HPLC分析结果有以下优点：

低颗粒物质污染：较硬的颗粒会刮伤增压泵,较软的颗粒会阻塞进入管柱前的滤膜。颗粒还可能改变样品的组分。

低离子污染：洗脱缓冲液的稳定性好。避免腐蚀性离子影响高压输液泵等配件的使用寿命。

低TOC污染：改善仪器侦测灵敏性,分辨率及重复性，更稳定的滞留时间,色谱基线稳定及保证管柱介质的合理使用寿命。

低微生物污染：避免管柱中出现有机分子的污染，色谱柱堵塞。低气泡：流量稳定，基线平稳，避免色谱图上出现噪声峰，干扰分析。